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關(guān)于0.1M PBS配方的問題

發(fā)布時(shí)間: 2017-02-09  點(diǎn)擊次數(shù): 18889次

要談0.1M PBS,我們可以先談一談0.01M PBS。因?yàn)?.01M PBS是比較清楚,沒什么爭論的。一般用于免疫組化的0.01M PBS配方為:NaH2PO4•2H2O 0.2964g,Na2HPO4•12H2O 2.9g,NaCl 8g。如果用于細(xì)胞培養(yǎng),可以用這個(gè)配方:NaCl 8.00,Na2HPO.12H2O 2.90,KCl 0.2,KH2PO4 0.24。大家可以看出,同樣是0.01M PBS,但他們兩的配方并不*一樣,不過,這個(gè)是可以理解的,做細(xì)胞培養(yǎng),當(dāng)然是要很好的保證細(xì)胞的活性,盡可能的保證所處的環(huán)境。而后一個(gè)配方加入了K,就是為了維護(hù)Na/K平衡。而前一個(gè)配方,只是做免疫組化,細(xì)胞已經(jīng)固定過的,也就不談什么活性不活性了,只要細(xì)胞不變形就OK了。因而維護(hù)Na/K平衡就沒有必要了。因而一切從簡。當(dāng)然了,用后一個(gè)配方做免疫組化行不行呢?當(dāng)然是一點(diǎn)問題都沒有。而如果用前一個(gè)配方高壓后用于細(xì)胞清洗,行與不行,本人沒有測(cè)試過,但為了保險(xiǎn)起見,還是算了。

我們看一看這兩個(gè)配方,NaCl占主要成分,維持滲透壓,而HPO4/ H2PO4當(dāng)然是維持PH值了。這個(gè)0.01M是什么意思?NaCl濃度為8/58.5=0.13675M,HPO4濃度為2.9/358.14= 0.0081M,H2PO4濃度為0.2964/156.01= 0.0019M。大家一看這個(gè)結(jié)果就知道,0.01M是指磷酸根濃度。

如此類推,那個(gè)0.1M的PBS的配方就應(yīng)該是NaH2PO4•2H2O 2.964g,Na2HPO4•12H2O 29g,NaCl 8g。用于細(xì)胞培養(yǎng)目前倒沒聽人說要用0.1M的PBS,所以在此就不做討論。

這樣一推算,感覺0.1M PBS也很簡單,但是,我百度或者谷歌0.1M PBS的配方,都沒有找到我所推論出的配方,找到的幾頁也都是關(guān)于0.1M PBS的應(yīng)用。這個(gè)怪了,也許是國家保密配方吧(開個(gè)玩笑)。這個(gè)0.1M PBS配方的錯(cuò)誤之處在于滲透壓。

我們簡單的計(jì)算一下滲透壓。πV=nRT 或π=cRT (式中π為稀溶液的滲透壓,V為溶液的體積,c為溶液的濃度,R為氣體常數(shù),n為溶質(zhì)的物質(zhì)的量,T為溫度)。這個(gè)東東算起來比較麻煩,簡單點(diǎn)說就是,滲透壓與總離子濃度(摩爾濃度)成正比。

看看生理鹽水,總濃度為2*9/58.5=0.307692308M

再看看0.01M PBS總離子濃度為0.13675*2+0.0081*3+0.0019*2=0.3016M

再看看0.1M PBS 總離子濃度為0.13675*2+0.081*3+0.019*2=0.2735+0.243+0.038 =0.5545M,這個(gè)與生理鹽水差老遠(yuǎn)了。因而用這個(gè)去做免疫組化或者去配多聚甲醛,就有點(diǎn)問題了。

濃度高了,當(dāng)然是減少一些NaCl了。0.307692308(標(biāo)準(zhǔn)生理鹽水)-(0.243+0.038)/ 2=0.026。0.026/2*58.5=0.78g。

修正后的0.1M PBS配方為NaH2PO4•2H2O 2.964g,Na2HPO4•12H2O 29g,NaCl 0.78g。

假如不加zui后一點(diǎn)NaCl,總離子濃度為:0.081*3+0.019*2=0.281M。這個(gè)濃度與理鹽水0.307692308M相關(guān)8.7%,而與0.01M PBS相差6.8%。因而我個(gè)人認(rèn)為,對(duì)于體外的死細(xì)胞而言,這個(gè)差別不是特別大。所以傳言的0.1M PBS的關(guān)相應(yīng)用應(yīng)該是筆誤。應(yīng)該是0.1M PB。

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