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SABC(小鼠IgG)-POD免疫組化試劑盒

SABC(小鼠IgG)-POD免疫組化試劑盒

簡要描述:貨  號:A0110
名  稱:SABC(小鼠IgG)-POD免疫組化試劑盒
規(guī)  格:100T
價(jià)  格:720.00

產(chǎn)品型號:

所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑

更新時(shí)間:2025-02-21

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

詳情介紹

SABC(小鼠IgG)-POD說明書

 

貨號:SA0011

 試劑盒組成:

1,  封閉液:10ml,5%BSA

2,  Bio-羊抗小鼠IgG:濃縮液100ul。

3,  SABC-POD:濃縮液100ul。

4,  稀釋液:30ml。

5,  顯色液:20×DAB顯色液A,20×DAB顯色液B

試劑盒簡介:

本試劑盒適合于一抗為小鼠IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn). DAB顯色。

SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測而設(shè)計(jì)的,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),同親和素一樣,對生物素有*的親和力,親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(IP=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大約可形成一百個(gè)左右的過氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。

自備試劑:

1.粘片劑多聚賴氨酸

2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)

3. 0.01M檸檬酸鈉緩沖液

4、蘇木素

 實(shí)驗(yàn)步驟:

以石蠟切片熱修復(fù)為例

1. 切片常規(guī)脫蠟至水。

2. 3%H2O2室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

3.可選步聚:a、熱修復(fù)抗原,將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10分鐘后,反復(fù)1-2次。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。b、酶消化滴加消化液,3710分鐘, PBS(pH7.2-7.6)洗滌2-3次。c、不處理,直接進(jìn)入下一步。

4. 滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 不洗。

5.用稀釋液將一抗(如小鼠抗IL-10)按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗,37 ℃ 1小時(shí)左右或20℃時(shí)2小時(shí)左右。也可4℃過ye。PBS(pH7.2-7.4)洗2分鐘×3次。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說,陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時(shí)間;背景過高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)

6.根據(jù)使用量,用稀釋液將Bio-羊抗小鼠濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul生物素化羊抗小鼠IgG濃縮液,混勻即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗2分鐘×3次。

7.根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-POD濃縮液,混勻即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗5分鐘×4次。

8.DAB顯色:根據(jù)用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50ul 20×DAB顯色液A,加入50ul 20×DAB顯色液B 。混勻后加至切片。室溫顯色, 鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。

9.蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。

 

對于細(xì)胞片,常規(guī)固定后,PBS漂洗兩次,再用0.5%Txiton X-100室溫20分鐘,PBS漂洗兩次,3%H2O2處理15分鐘;PBS漂洗兩次,下接上面第4步。

 

對于冰凍切片,固定后,可用PBS漂洗兩次,再接上面第二步。

 

注意事項(xiàng):如果染色背景過高,在SABC反應(yīng)之后,DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS洗2次,然后DAB顯色。

 

因?yàn)槊庖呓M化指標(biāo)眾多,標(biāo)本不一,此步驟僅作參考。



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